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小鼠明矾OVA致哮喘模型
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小鼠明矾OVA致哮喘模型
哮喘是一种由多种炎症细胞及炎症介质参与的气道慢性炎症性疾病，气道炎症、平滑肌功能紊乱和气道重塑是哮喘的主要病理改变，发病率呈逐年增加趋势。
现已发现有多种细胞因子参与哮喘发病的调控，其中关于Th1/Th2类细胞因子失衡学说为目前的研究热点。IFN-γ、IL-4分别是Th2、Th2细胞的特征性细胞因子，在哮喘的发病机制中，IFN-γ和IL-4的不平衡是引起IgE产生异常和哮喘发病的重要因素，调节Th1细胞因子活性或抑制Th2细胞因子已成为哮喘防治探讨的新热点。最新的研究发现在抗原刺激后气道上皮可以使前炎性细胞因子IL-25表达增加，促使IL-4及IL-13等Th2细胞因子过量表达
1.实验动物
SPF级Balb/C小鼠，雄性，周龄为4w~6w，体重为20g~22g。2.实验分组
实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。
3.主要试剂卵蛋白（OVA）明矾4.实验周期6W
5.建模方法
1.明矾致敏佐剂：10%明矾溶液（溶于双蒸水）2ml与500ug/mlOVA（溶于PBS）2ml等量混合后，用NAOH调PH值为6.5，室温孵育60min，750r/min，离心5min，去掉上清液，重溶于2mlPBS。致敏时每只小鼠腹腔注射200ul，其中含2mg明矾和100ugOVA。
2.致敏：小鼠分别于第0、14天时腹腔注射明矾致敏佐剂0.2ml，对照组注射相同剂量的PBS溶液，正常饮食饲养。
3.激发：雾化吸入，第21天时小鼠放入有机玻璃箱，5%OVA雾化吸入。每天30min，共7d，最后一次致敏后24h内检测。以小鼠出现烦躁不安、呼吸急促、腹肌痉挛等阳性反应作为造模成功的标准。对照组采用PBS雾化吸入，其他操作均相同。
4.末次激发24h麻醉小鼠，摘眼球取血，室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清，放入-80冰箱冻存。取左肺组织于4%多聚甲醛溶液中固定用于病理染色；右肺组织液氮冷冻，-80℃保存用于分生标本。
6.模型评估：
1.一般观察哮喘模型组大鼠在激发开始后出现打喷嚏、点头呼吸、呼吸急促、哮鸣音、腹肌收缩、烦躁等典型哮喘发作症状，并且后期观察中发现饮食减少、毛色无光泽、行动迟缓及体重逐渐下降。
2.支气管肺泡灌洗液(BALF的收集最后1次激发24h后(第28天将各组小鼠颈椎脱臼处死,无菌条件下分离气管,