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叶绿体色素的提取分离理化性质和叶绿素含量的测定

时间：2023-03-01 01:34:59 下载该word文档

实验报告
课程名称：植物生理学及实验（甲）实验类型：实验名称：叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定姓名：专业：学号：同组学生姓名：指导老师：实验地点：实验日期：一、实验目的和要求

二、实验内容和原理
装三、主要仪器设备四、操作方法与实验步骤

订五、实验数据记录和处理六、实验结果与分析七、讨论、心得一、实验目的和要求
1、掌握植物中叶绿体色素的分离和性质鉴定、定量分析的原理和方法。 2、熟悉在未经分离的叶绿体色素溶液中测定叶绿素a和b的方法及其计算。二、实验内容和原理
以青菜为材料，提取和分离叶绿体色素并进行理化性质测定和叶绿素含量分析。
原理如下：
1、叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，常用95%的乙醇或80%的丙酮提取。
2、皂化反应。叶绿素是二羧酸酯，与强碱反应，形成绿色的可溶性叶绿素盐，
就可与有机溶剂中的类胡萝卜素分开。
COOCH3 COO
C32H30ON4Mg + 2KOH C32H30ON4Mg + 2KOH +CH3OH +C20H39OH COOC20H39 COO-
3、取代反应。在酸性或加温条件下，叶绿素卟啉环中的Mg++可依次被H+和Cu++取代形成褐色的去镁叶绿素和绿色的铜代叶绿素。(H+取代Mg2+, Cu2+ (Zn2+取代H+ 褐色绿色
4、叶绿素受光激发，可发出红色荧光，反射光下可见红色荧光。
5、定量分析。叶绿素吸收红光和兰紫光，红光区可用于定量分析，其中645和663用于定量叶绿素a,b及总量，而652可直接用于总量分析。
根据朗伯-比尔定律，最大吸收光谱不同的两个组分的混合液，它们的浓度C与吸光值之间有如下的关系： OD1=Ca*ka1+Cb*kb1 OD2=Ca*ka2+Cb*kb2 查阅文献得，叶绿素a和b的80％丙酮溶液，当浓度为1g/L时，比吸收系数k值如下。
波长/nm 叶绿素a 663 645

比吸收系数k 叶绿素b

-将数值代入式子得：OD663=*Ca+*Cb OD645=*Ca+*Cb 经整理后，得到式子：Ca= OD663 - OD645 Cb= OD645 - OD663

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