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叶绿体色素的提取分离及理化性质检测实验报告

时间：2023-03-01 01:34:59 下载该word文档

实验名称：叶绿体色素的提取、分离、理化性质
系别：机械工程系班级：机械11实验者：潘霖学号：2011010389
同组姓名：肖鹤翀实验日期：2011.10.22
Ⅰ 提取与分离

一、实验目的：
1. 学习应用薄层色谱法分离叶绿体色素的实验方法。
2. 了解叶绿素的组成、性质和测定叶绿素有助于理解光合作用的本质。
二、实验原理: 叶绿体是进行光合作用的细胞器。叶绿体中的叶绿素a，叶绿素b，胡萝卜素和叶黄素与类囊体膜结合成为色素蛋白复合体。这些色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇等有机溶剂提取。提取液可用薄层色谱法加以分离和鉴别。
薄层层析色谱法是将吸附剂均匀地涂在玻璃板上成一薄层，将此吸附剂薄层作为固定相，把待分离的样品溶液点在薄层板的下端，然后用一定量的溶剂作流动相，将薄层板的下端浸入到展开剂当中。由于吸附剂对不同物质的吸附能力大小不同，吸附力强的物质相对移动慢一些，而吸附力弱的物质则相对移动快一些，从而使各组分有不同的移动速度而彼此分开。
植物活性成分的分离常用薄层层析法和柱层析法，其中柱层析适用于大量制备。本实验采用薄层层析色谱法，其中固定相用硅胶预制板。
三、实验材料与试剂: 1. 新鲜的菠菜叶片。
2. 体积分数为95%的乙醇，碳酸钙粉末，展开剂（石油醚：丙酮：苯=7:5:1，体积比）。 3. 研钵，漏斗，三角瓶，剪刀，点样毛细管，层析缸，硅胶预制板，滤纸。
四、实验步骤: （一）色素提取液的制备
1. 取新鲜叶片4~5片，洗净，擦干叶表面，去除中脉剪碎，放入研钵中。 2. 向研钵中加入少量CaCO3粉末，再加2~3ml体积分数为95%的乙醇，充分研磨至糊状，再加10~15ml体积分数为95%的乙醇，上清液用漏斗过滤出，残渣再用10ml体积分数为95%的乙醇冲洗一次，一同过滤于三角瓶中，即制成叶绿体色素提取液。提取液应避光保存，因提取量较大，可用于其他相关实验（如后面的叶绿素理化性质的验证）。
（二）叶绿体色素的分离
1. 取硅胶预制板一个，用点样毛细管吸取上述提取液，平行于硅胶板的短边，距下边缘1cm处用毛细管划线，保证划线细直。自然风干后划第二次，重复操作3~4次，确保划的滤液细线颜色足够深，从而保证分离结果更加明显。
2.
取已经加入适量展开剂的层析缸，把硅胶预制板划过滤液细线的一端放入，使其下端浸入展开剂中，但注意展开剂液面不可没过滤液细线。迅速改好层析缸盖（减少展开剂中的苯的挥发）。注意观察硅胶预制板上的颜
色变化，不久即可看到各种色素的色带。
3.
当各种色素得到较好分离，展开剂前沿接近硅胶预制板上端边缘处时，取出硅胶预制板迅速用铅笔标出展开剂前沿和各色素带的位置。 4. 测量并记录前沿和各个色素带距离原点的距离。
五、实验结果与分析:
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色素带自上而下分别为：胡萝卜素，叶绿素a，叶绿素b，叶黄素。

经过薄层色谱分离后，叶绿素a为蓝绿色，叶绿素b为黄绿色，叶黄素为鲜黄色，胡萝卜素为橙黄色。衡量各色素带在薄层中的位置的相对比移值Rf= （斑点中心到原点的距离）/（溶剂前沿至原点的距离）各自到原点的距离：展开剂前沿：8.50cm 胡萝卜素：8.10cm ，Rf=0.9 叶绿素a：6.70cm ，Rf=0.79 叶绿素b：6.30cm ，Rf=0.74 叶黄素：5.90cm ，Rf=0.69 事实上硅胶预制板上不止出现了四种色素带，但与实验无关，故忽略。
Ⅱ 叶绿体色素理化性质的检验
一、实验目的：
验证叶绿体素的理化性质。

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