不同固定剂对核膜蛋白免疫荧光效果的比较研究吴卓玲1，2，3，赖艳花1，杨 柳1，2，3*【摘 要】免疫荧光技术是检测蛋白质细胞定位的常用方法，不同的细胞固定方法可能会影响染色效果。本文以核膜蛋白lamin A/C、emerin为研究对象，利用3种不同固定剂进行免疫荧光实验。结果表明，利用体积分数为4%多聚甲醛溶液固定细胞通常可以获得良好的免疫荧光染色效果，利用甲醇固定时lamin A/C染色效果相对较弱，而利用丙酮固定的细胞其荧光信号往往呈现为核膜不连续染色。综合分析，作为最常用的固定剂，利用4%多聚甲醛溶液通常可以取得较好的染色效果；但对于新的目的蛋白来说，由于蛋白质的结构与功能特异性，适合的固定方法仍需要具体的试验检测才能确定。【期刊名称】广西师范大学学报（自然科学版）【年(卷),期】2018(036)001【总页数】5【关键词】固定剂；免疫荧光；核膜蛋白免疫荧光细胞化学技术是采用荧光素标记的已知抗体(或抗原)作为探针，检测待测组织、细胞标本中的靶抗原(或抗体)。经过反应，形成的抗原抗体复合物带有荧光素，在荧光显微镜下可分辨出抗原或抗体所在位置及性质[1]。影响免疫荧光效果的因素有很多，不同的细胞固定方式可直接影响实验结果，甚至会得出错误的实验结论[2]。使用的固定剂主要有交联剂和有机溶剂两类。交联剂主要有多聚甲醛、甲醛，有机溶剂主要有甲醇、丙酮等，但是同一种蛋白使用不同的固定剂得出的结果可能不一样，目前尚无一种标准固定剂可用于各种抗原的固定 [3-4]。研究发现，不同的固定剂对核膜蛋白有不同的影响。本文探讨3种不同的固定方法对细胞核膜蛋白的影响，为选出最适合某一蛋白的固定方法提供依据。本文中使用的子宫颈癌细胞Hela细胞具有无限增殖能力，是生物学与医学研究、肿瘤研究中常用的一种细胞。1 材料与方法1.1 细胞培养用含有10 %胎牛血清的DMEM培养基培养Hela细胞，当细胞融合度达90%时，用0.25%胰蛋白酶溶液消化成单细胞悬液并接种于预先放有专用盖玻片的24孔板内，接种2组，每组3张爬片，细胞放于37 ℃、CO2体积分数为5%的培养箱培养过夜。1.2 固定方式样本采用3种不同的固定方式：方式Ⅰ——4%多聚甲醛溶液(PFA)室温固定15 min后，用体积分数为0.1% Trition-X100溶液(用PBS稀释)通透15 min；方式Ⅱ——预冷的甲醇-20 ℃固定10