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正在进行安全检测...

时间：2023-11-17 22:57:23 下载该word文档

细胞分裂中期纺锤体和染色体结构荧光观察
【实验材料】（1）仪器
细胞培养间，超净工作台，细胞培养箱，倒置荧光显微镜，低速细胞离心机，水浴锅，冰箱，移液枪。
（2）试剂
高糖DMEM液体培养基，胎牛血清（FBS），0.25%胰酶消化液，PBS，200U/μl青链霉素储备液（P/S），0.2%秋水仙碱，牛血清白蛋白（BSA），4%多聚甲醛，75%酒精，TritonX-100，鼠抗α-Tubulin抗体，TRITC-羊抗鼠IgG抗体，DAPI染色液，抗荧光淬灭封片液。
（3）耗材及器皿
1ml,200μl,20μl枪头，15ml离心管，1.5ml离心管，12孔培养板，60mm细胞培养皿，圆形或方形盖玻片，载玻片，烧杯。
【实验方法】1．细胞传代培养：
（1）细胞传代前准备

A：用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。
B：完全培养基配制：取50ml离心管，加入45mlDMEM培养基，5mlFBS和50μl双抗储备液，配制成含10%FBS，100U/ml双抗的完全培养基。
C：预热培养用液：把已经配制好培养液、PBS和胰蛋白酶放入37℃水浴锅内预热。
D：将细胞传代所需器械，如烧杯，移液枪，离心管，培养皿，试管架，枪头盒等，用75%的酒精消毒后，放置到超净台中，放置位置要合理，保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。E：取出预热好的培养用液：取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
（2）细胞传代
A：取长有Hela细胞的培养皿，在倒置显微镜下观察细胞形态和数量，待细胞生长至快互相接触又未接触时，进行细胞传代。
B：吸掉旧培养液，用PBS洗涤细胞一至二次。

C：加入1ml0.25%胰酶消化液，37℃作用3分钟，于倒置显微镜下观察，待细胞将要分离而呈现圆粒状时，加入3ml适量含10%血清的新鲜培养基终止胰酶作用，用移液器上下吸放数次，将细胞从培养皿底吹打下来，并打散细胞团块，将细胞悬液转移到新的细胞培养瓶中。

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