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    ・５２・　解放军医药杂志２０１４年７月第２６卷第７期Ｍｅｄ＆Ｐｈａｒｍ　Ｊ　Ｃｈｉｎ　ＰＬＡ，Ｖｏ１．２６，Ｎｏ．７，Ｊｕ１．２０１４　・论著・　人ＧＡＤＤ４５ｏＬ荧光素酶报告基因质粒的构建与鉴定　殷宏，王　恺，田世民，安子扬，邹明强　［摘要］　目的　为检测环境中可能存在的致癌物，建立生长阻滞和ＤＮＡ损伤诱生蛋白４５（ＧＡＤＤ４５ｃｔ）双荧光素　报告基因系统，构建新型人ＧＡＤＤ４５ｃ￣荧光素酶报告基因质粒。方法　在ＧＡＤＤ４５ｃｔ基因启动子序列２．２　ｋｂ及其后基　因组ＤＮＡ序列２．６　ｋｂ范围内，设计３对引物进行搭桥ＰＣＲ，获得全长为４９２４　ｂｐ的目的序列，插入ｐＧＬ４．１０［１ｕｃ２］质　粒相应位点内。质粒构建成功后测定全长并进行酶切鉴定。结果段，成功构建了人ＧＡＤＤ４５ａ报告基因质粒（ｐＧＤ２．２Ｋ—ｌｕｃ２）。结论告基因系统打下了基础。　正确扩增了全长为４．９　ｋｂ的人ＧＡＤＤ４５基因片　在质粒设计中加入了存在ｐ５３非依赖性ＢＲＣＡ１　结合位点的ＧＡＤＤ４５ｃ￣基因第１个内含子，构建成功的ｐＧＤ２．２Ｋ　１ｕｃ２，为转染人源性细胞建立ＧＡＤＤ４５ｄ双荧光素报　［关键词］　生长阻滞和ＤＮＡ损伤诱生蛋白４５；乳腺癌易感基因；聚合酶链反应　［中国图书资料分类号］　Ｒｌｌ４　［文献标志码］　Ａ　［文章编号］　２０９５—１４０Ｘ（２０１４）０７—００５２－０４　［ＤＯＩ］　１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．２０９５—１４０Ｘ．２０１４．０７．０１３　Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｄｅｎｔｉｉｃａｔｉｆｏｎ　ｏｆ　Ｈｕｍａｎ　ＧＡＤＤ４５ａ－ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ　Ｒｅｐｏｒｔｅｒ　Ｇｅｎｅｓ　Ｐｌａｓｍｉｄ　ＹＩＮ　Ｈｏｎｇ，ＷＡＮＧ　Ｋａｉ，ＴＩＡＮ　Ｓｈｉ—ｍｉｎ，ＡＮ　Ｚｉ－ｙａｎｇ，ＺＯＵ　Ｍｉｎｇ—ｑｉａｎｇ（Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ　ＡＱＳＩＱ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１００１２３，Ｃｈｉｎａ）　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｇｅｎｉｃ　ｓｙｓｔｅｍ　ｆｏｒ　ＧＡＤＤ４５　ｃｔ　ｄｕａｌ　ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ　ｒｅｐｏｒｔｅｒ（ｇｒｏｗｔｈ　ａｒｒｅｓｔ　ＤＮＡ　ｄａｍａｇｅ４５ｃｔ）ａｎｄ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ　ａ　ｎｅｗ　ｈｕｍａｎ　ＧＡＤＤ４５ｅ￣－ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ　ｒｅｐｏｒｔｅｒ　ｇｅｎｅｓ　ｐｌａｓｍｉｄ　ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｃａｒ—　ｃｉｎｏｇｅｎｓ　ｐｒｅｓｅｎｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｂｒｉｄｇｅ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＰＣＲ）ｗａｓ　ｄｅｓｉｇｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｒｅｅ　ｐａｉｒｓ　ｏｆ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ａｔ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｆｒｏｍ　ｈｕｍａｎ　ＧＡＤＤ４５ｃｔ　ｇｅｎｅ　ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｃｏｖｅｒｉｎｇ　２．２ｋｂ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ　２．６ｋｂ　ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ　ｓｅ—　ｑｕｅｎｃｅｓ．Ｔｈｅ　ｆｕｌｌ　ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　４９２４　ｂｐ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｗａｓ　ｉｎｓｅｒｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ｓｉｔｅ　ｏｆ　ｐＧＬ４．１０［１ｕｃ２］ｐｌａｓｍｉｄ．Ａｆｔｅｒ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐｌａｓｍｉｄ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ，ｆｕｌｌ－ｌｅｎｇｔｈ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ，ａｎｄ　ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ　ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｉ—　ｄｅｎｔｉｆｉｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｆｕｌｌ　ｌｅｎｇｔｈ　４．９　ｋｂ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ＧＡＤＤ４５ｏｔ　ｇｅｎｅ　ｆｒａｇｍｅｎｔ　ｗａｓ　ｃｏｒｒｅｃｔｌｙ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ＧＡＤＤ４５ｏＬ—　ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ　ｒｅｐｏｒｔｅｒ　ｐｌａｓｍｉｄ（ｐＧＤ２．２ｋ—ｌｕｃ２）ｗａｓ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｐｌａｓｍｉｄ　ｐＧＤ２．２ｋ—ｌｕｃ２　ｉｓ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｐｌａｓｍｉｄ　ｗｉｔｈ　ａｄｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｉｎｔｒｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｕｍａｎ　ＧＡＤＤ４５　ｃ￣ｇｅｎｅ，ｗｈｅｒｅ　ａ　ｐ５３一ｉｎ—　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ＢＲＣＡ　１　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｓｉｔｅ　ｉｓ　ｏｃｃｕｐｉｅｄ，ａｎｄ　ｉｔ　ｂｕｉｈｓ　ｔｈｅ　ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ　ｔｈｅ　ｈｕｍａｎ　Ｇａｄｄ４５　ｏｔ　ｄｕａｌ　ｌｕｃｉｆｅｒ—　ａｓｅ　ｒｅｐｏｒｔｅｒ　ｇｅｎｅ　ｓｙｓｔｅｍ．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］　Ｇｒｏｗｔｈ　ａｒｒｅｓｔ　ＤＮＡ　ｄａｍａｇｅ４５　ｃｔ；Ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｇｅｎｅ；Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　生长阻滞和ＤＮＡ损伤诱生蛋白４５　（ＧＡＤＤ４５ｏｔ）是第１个被检出的ｐ５３下游靶基因，可　启动子及其第３个内含子融合到绿色荧光蛋白前　后，转染人淋巴母细胞ＴＫ６，建立了Ｇｒｅｅｎ　Ｓｃｒｅｅｎ　ＨＣ　由ｕＶ放射、低氧、离子辐射、基因毒性药物等损伤　因素快速诱导产生，可以通过ｐ５３依赖及非依赖两　条途径被诱导表达增高，在调控Ｇ　／Ｍ细胞周期监　测点、维持基因组稳定性、细胞凋亡、ＤＮＡ损伤修复　ａｓｓａｙ。该试验具有简便、高通量、受试物用量少等　优点，在产品研发早期的筛选等方面有良好的应用　前景　。　在人ＧＡＤＤ４５　第１个内含子内，尚存在ｐ５３　以及信号传导等重要细胞生命活动中起重要作　非依赖性的乳腺癌易感基因（ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｓｕｓｃｅｐｔｉ．　ｂｉｌｉｔｙ　ｇｅｎｅ，ＢＲＣＡ１）结合位点　，此位点在Ｈａｓｔ—　用　。与其他生长阻滞和ＤＮＡ损伤诱导基因进行　比较，Ｈａｓｔｗｅｌｌ等　。　确定ＧＡＤＤ４５ａ是１个能够识别　基因组损伤的重要生物标志物，并将ＧＡＤＤ４５ｏｔ的　［基金项目］　中国检验检疫科学研究院专项资金资助项目　（２０１２ＪＫ０４３）　ｗｅｌｌ等建立的Ｇｒｅｅｎ　Ｓｃｒｅｅｎ　ＨＣ　ａｓｓａｙ质粒中未予考　虑。本研究在质粒设计中加入此位点，将人源性　ＧＡＤＤ４５ｏｔ基因转录起始位点前２．２　ｋｂ至截止第４　个外显子内翻译终止位点的全长基因组ＤＮＡ序列，　全长共计４．９　ｋｂ的目的基因片段，利用搭桥ＰＣＲ法　扩增并融合至报告基因质粒ｐＧＩＡ．１０［１ｕｃ２］内荧光　素酶报告基因前，成功构建了人ＧＡＤＤ４５ｏ￣荧光素　［作者单位］　１００１２３北京，中国检验检疫科学研究院，国家　质检总局毒理重点实验室　

    ・５４・　医药杂志２０１４年７月第２６卷第７期Ｍｅｄ＆Ｐｈａｒｍ　Ｊ　Ｃｈｉｎ　ＰＬＡ，Ｖｏ１．２６，Ｎｏ．７　Ｊｕ１．　Ｑ　３讨论　人ＧＡＤＤ４５ｏｔ基因位于染色体１ｐ３１．１—１ｐ３１．２　位置，全长４１３８　ｂｐ，有４个外显子，ｍＲＮＡ全长　１３５５　ｂｐ，编码１６５个氨基酸　…。其编码的　ＧＡＤＤ４５ｏｔ蛋白大小约１８　ｋＤ，是１个ＤＮＡ损伤诱导　蛋白，在多种损伤因素，如电离辐射、紫外线照射、甲　磺酸甲酯、二甲基苯蒽等作用下，以ｐ５３依赖和非依　赖的方式表达上调…。。　。　在转录水平上，依赖ｐ５３调控的ＧＡＤＤ４５ａ表　达机制有两种：①ｐ５３直接结合在ＧＡＤＤ４５ｃ￣基因的　第３个内含子中高度保守的ｐ５３结合位点（ｐ５３基　序），促进ＧＡＤＤ４５ｏＬ的转录。此位点在Ｈａｓｔｗｅｌｌ等　构建的Ｇｒｅｅｎ　Ｓｃｒｅｅｎ　ＨＣ　ａｓｓａｙ质粒中有明确标识。　②ｐ５３还可以借助在ＧＡＤＤ４５ｏｔ启动子区的ＷＴ１结　合位点（ＷＴ１基序），通过与ＷＴ１相互作用来调节　ＧＡＤＤ４５ｏｔ的转录表达¨　。ＧＡＤＤ４５ｃ￣在ｐ５３非依　赖情况下的主要调节方式是ＢＲＣＡ１对ＧＡＤＤ４５ｃ￣　的转录表达调节。ＢＲＣＡ１对ＧＡＤＤ４５ｃｔ基因的转录　调节至少表现在３个重要的ＧＡＤＤ４５ｃ￣基因基序诱　导上：①在第１个内含子的ＢＲＣＡ１结合位点Ｅ　９］，此　位点在Ｇｒｅｅｎ　Ｓｃｒｅｅｎ　ＨＣ　ａｓｓａｙ中未被加人；②在第３　个内含子的ＺＢＲＫ１结合位点　；③在ＧＡＤＤ４５ａ启　动子区．１２１到．７５的ＯＣＴ．１和ＣＡＡＴ　ｂｏｘ位点¨　。　在充分考虑了ｐ５３非依赖情况下ＢＲＣＡ１对　ＧＡＤＤ４５ｃｔ的转录表达调节作用后，本研究在质粒构　建中引入了人ＧＡＤＤ４５ｃｔ基因第１个内含子。　在毒理学领域，由于传统动物实验费时费力并　且价格昂贵，加之要求降低动物使用的社会压力，以　及大量需要评价的化合物，故而需要为毒性评估发　展高通量快速检测方法。２００７年，由美国国家研究　评议会（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｏｕｎｃｉｌ，ＮＲＣ）提出的一　份报告指出，在未来的２Ｏ年将使用人源性细胞进行　体外实验来描述毒物的毒性特征¨　。基于细胞的　毒性试验，在短时间内可以进行大量化学物质的毒　性检测，对于毒物的分类及进一步筛选是非常理想　的工具　。荧光素酶报告基因检测方法由于其反　应灵敏、简便快速等优点，已被广泛应用于包括遗传　毒性及氧化应激等多种高通量检测系统　。　Ｈｕｇｈｅｓ等曾用Ｇａｕｓｓｉａ　ｌｕｓｉｆｅｒａｓｅ基因替代Ｇｒｅｅｎ　Ｓｃｒｅｅｎ　ＨＣ　ａｓｓａｙ中的ＧＦＰ报告基因，并用ＥＣＶＡＭ　推荐的全套评估基因毒性试验化合物进行了两种方　法的比较。比较结果显示，大多数化合物用两种方　法检测的结果相同，只有３个化合物的检测结果不　同，其中间苯二酚由于有轻度的自发荧光，在　ＧＡＤＤ４５ａ—ＧＬｕｃ试验中测定为阳性，而在　ＧＡＤＤ４５仅一ＧＦＰ试验中测定为阴性　。此研究结果　提示，与Ｇｒｅｅｎ　Ｓｃｒｅｅｎ　ＨＣ　ａｓｓａｙ相比较，　ＧＡＤＤ４５ａ．ＧＬｕｃ试验还可以用于荧光物质的遗传毒　性检测。　基于以上背景分析，本实验将人ＧＡＤＤ４５ｏｔ基　因上游２．２　ｋｂ启动子至翻译终止位点的全长基因　组ＤＮＡ插入质粒ｐＧＬ４．１０［１ｕｃ２］内，构建了包含已　知ｐ５３依赖与非依赖各结合位点的荧光素酶报告基　因质粒（ｐＧＤ２．２Ｋ—ｌｕｃ２）。在下一步实验中计划将　此质粒转染人源性细胞，评估其实用性及能否用于　大规模毒物的检测。　致谢感谢北京唯尚立德生物科技有限公司对本实验给予　的技术帮助　［参考文献］　［１］　冯雪凤，王迎伟．ＤＮＡ损伤修复相关基因Ｇａｄｄ４５的研　究进展［Ｊ］．癌变・畸变・突变，２００９，２１（５）：４０４－４０７．　［２］Ｈｏｌｌａｎｄｅｒ　Ｍ　Ｃ，Ｋｏｖａｌｓｋｙ　Ｏ，Ｓａｌｖａｄｏｒ　Ｊ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｄｉｍｅ—　ｔｈｙｌ－－ｂｅｎｚａｎｔｈｒａｃｅｎｅ　ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｉｎ　Ｇａｄｄ４５　ａ－－ｎｕｌｌ　ｍｉｃｅ　ｉｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ＤＮＡ　ｒｅｐａｉｒｅ　ａｎｄ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｍｕｔａｔｉｏｎ　ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００１，６１（６）：　２４８７—２４９１．　［３］　Ｂｏｄｏ　Ｊ，Ｊａｋｕｂｉｋｏｖａ　Ｊ，Ｃｈａｌｕｐａ　Ｉ，ｅｔ　ａ１．Ａｐｏｐｔｏｔｉｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｔｈｙｌ－４一ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔ０ｂｕｔａｎｏａｔｅ　ｉｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＤＮＡ　ｄａｍａｇｅ，ｐｒｏｔｅａｓｏｍａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐ５３　ａｎｄ　ｐ２１　ｃｉｐ　１／ｗａｆ　１［Ｊ］．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，２００６，１１（８）：１２９９一　ｌ３１０．　［４］　宋咏梅，童彤，付明，等．Ｇａｄｄ４５介导抑癌基因ＢＲＣＡ１　诱导的Ｇ２／Ｍ期阻滞［Ｊ］．癌症，２００４，２３（５）：５１７—５２１．　［５］　Ｚｈａｎ　Ｑ．Ｇａｄｄ４５ｃ￣，ａ　ｐ５３一ａｎｄ　ＢＲＣＡ　１一ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｓｔｒｅｓｓ　ｐｒｏｔｅｉｎ，ｉｎ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　ＤＮＡ　ｄａｍａｇｅ［Ｊ］．Ｍｕｔａ—　ｔｉｏｎ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００５，５６９（１）：１３３—１４３．　［６］Ｈａｓｔｗｅｌｌ　Ｐ　Ｗ，Ｃｈａｉ　Ｌ　Ｌ，Ｒｏｂｅｒｔｓ　Ｋ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｈｉｇｈ－ｓｐｅｃｉ—　ｉｆｅｉｔｙ　ａｎｄ　ｈｉｇｈ—ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｇｅｎｏｔｏｘｉｅｉｔｙ　ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ｉｎ　ａ　ｈｎ—　ｍａｎ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ：　Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＧｒｅｅｎＳｃｒｅｅｎ　ＨＣ　ＧＡＤＤ４５　ａ—ＧＦＰ　ｇｅｎｏｔｏｘｉｃｉｔｙ　ａｓｓａｙ［Ｊ］．Ｍｕｔａｔｉｏｎ　Ｒｅ—　ｓｅａｒｃｈ，２００６，６０７（２００６）：１６０—１７５．　［７］　张天宝．当前遗传毒理学的研究动态［Ｊ］．毒理学杂　志，２００７，２１（５）：３５９—３６５．　［８］Ｔａｍｕｒａ　Ｒ　Ｅ，Ｖａｓｃｏｎｃｅｌｌｏｓ　Ｊ　Ｆ，Ｓａｒｋａｒ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．ＧＡＤＤ４５　ｐｒｏｔｅｉｎｓ：ｃｅｎｔｒａｌ　ｐｌａｙｅｒｓ　ｉｎ　ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｍｏ—　ｌｅｃｕｌａｒ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１２，１２（５）：６３４・６５１．　［９］Ｈａｒｋｉｎ　Ｄ　Ｐ，Ｂｅａｎ　Ｊ　Ｍ，Ｍｉｋｌｏｓ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＧＡＤＤ４５　ａｎｄ　ＪＮＫ／ＳＡＰＫ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ　ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＢＲＣＡ１［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，１９９９，９７（５）：　５７５—５８６．　［１Ｏ］李鹏飞，杨成旺，苏秀兰．Ｇａｄｄ４５ｃ￣基因对细胞调控作　
    医药杂志２０１４年７月第２６卷第７期Ｍｅｄ＆Ｐｈａｒｍ　Ｊ　Ｃｈｉｎ　ＰＬＡ，Ｖｏ１．２６，Ｎｏ．７，Ｊｕ１．２０１４　・５５・　用的研究进展［Ｊ］．内蒙古医学院学报，２０１０，３２（２）：　１５５．１５８．　［１１］姬峻芳，吴文，詹启敏．Ｇａｄｄ４５ｃｔ在抑制细胞转化和肿　瘤恶性进展中的作用［Ｊ］．生物化学与生物物理进展，　２００６，３３（１２）：１１４６—１１５３．　［１２］Ｋａｓｔａｎ　Ｍ　Ｂ，Ｚｈａｎ　Ｑ，ｅｌ—Ｄｅｉｒｙ　Ｗ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ａ　ｍａｍｍａｌｉａｎ　ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ　ｐａｔｈｗａｙ　ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ　ｐ５３　ａｎｄ　ＧＡＤＤ４５　ｉｓ　ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ　ｉｎ　ａｔａｘｉａ・ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，１　９９２，７　１　（４）：５８７—５９７．　［１３］Ｇｕｊｕｌｕｖａ　Ｃ　Ｎ，Ｂａｃｋ　Ｊ　Ｈ，Ｓｈｉｎ　Ｋ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＵＶ—　ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ，ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｐ５３，ｇａｄｄ１５３　ａｎｄ　ｇａｄｄ４５　ｇｅｎｅｓ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ａｎｄ　ＨＰＶ－ｉｍ－　ｍｏｒｔａｌｉｚｅｄ　ｈｕｍａｎ　ｏｒａｌ　ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，　１９９４，９（７）：１８１９－１８２７．　［１４］李云峰，钱海利，林晨．Ｇａｄｄ４５ｃｔ的表达调控与功能　［Ｊ］．医学分子生物学杂志，２００７，４（５）：４３４４３８．　［１５］Ｚｈａｎ　Ｑ，Ｃｈｅｎ　Ｉ　Ｔ，Ａｎｔｉｎｏｒｅ　Ｍ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｔｕｍｏｒ　ｓｕｐｐｒｅｓ—　ｓｏｒ　ｐ５３　ｃａｎ　ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅ　ｉｎ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＧＡＤＤ４５　ｐｒｏｍｏｔｅｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ａｂｓｅｎｃｅ　ｏｆ　ｄｉｒｅｃｔ　ＤＮＡ　ｂｉｎｄｉｎｇ　［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ａｎｄ　Ｃｅｌｌｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９８，１８（５）：２７６８—　２７７８．　［１６］Ｚｈｅｎｇ　Ｌ，Ｐａｎ　Ｈ，Ｌｉ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ—ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｔｒａｎ—　ｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ　ｃｏｒｅｐｒｅｓｓｏｒ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ＢＲＣＡ１　ｔｈｒｏｕｇｈ　ａ　ｎｏ—　ｖｅｌ　ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ，ＺＢＲＫ１［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｅｌｌ，　２０００，６（４）：７５７—７６８．　［１７］Ｊｉｎ　Ｓ，Ｚｈａｏ　Ｈ，Ｆａｎ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．ＢＲＣＡ１　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＧＡＤＤ４５　ｐｒｏｍｏｔｅｒ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２０００，１９（２０００）：　４０５０－４０５７．　［１　８］Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｏｕｎｃｉｌ．Ｔｏｘｉｃｉｔｙ　Ｔｅｓｔｉｎｇ　ｉｎ　ｔｈｅ　２　ｌ　ｓｔ　Ｃｅｎｔｕｒｙ：Ａ　Ｖｉｓｉｏｎ　ａｎｄ　ａ　Ｓｔｒａｔｅｇｙ［Ｒ］．Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ　ＤＣ：　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ａｃａｄｅｍｉｅｓ　Ｐｒｅｓｓ，２００７．　［１９］Ｓｉｍｍｏｎｓ　Ｓ　Ｏ，Ｆａｎ　Ｃ　Ｙ，Ｒａｍａｂｈａｄｒａｎ　Ｒ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｓｔｒｅｓｓ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｐａｔｈｗａｙ　ｓｙｓｔｅｍ　ａｓ　ａ　ｓｅｎｔｉｎｅｌ　ｅｎｓｅｍｂｌｅ　ｉｎ　ｔｏｘｉｃｏ—　ｌｏｇｉｃａｌ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２００９，１　１　１　（２）：２０２—２２５．　［２Ｏ］　Ｗｅｓｔｅｒｉｎｋ　Ｗ　Ｍ，Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ　Ｊ　Ｃ，Ｈｏｒｂａｃｈ　Ｇ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ＲＡＤ５１　Ｃ，Ｃｙｓｔａｔｉｎ　Ａ，ｐ５３　ａｎｄ　Ｎｒｆ２　ｌｕ—　ｃｉｆｅｒａｓｅ—ｒｅｐｏｒｔｅｒ　ａｓｓａｙｓ　ｉｎ　ｍｅｔａｂｏｌｉｃａｌｌｙ　ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ　ＨｅｐＧ２　ｃｅｌｌｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ｏｆ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ。ｂａｓｅｄ　ｇｅｎｏｔｏｘｉｃｉｔｙ　ａｎｄ　ｏｆ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅａｒｌｙ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｐｈａｓｅ　ｏｆ　ｄｒｕｇ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｍｕｔａｔｉｏｎ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１０，６９６（１）：２１—　４０．　［２１］　Ｗｕ　Ｋ　Ｃ，ＭｃＤｏｎａｌｄ　Ｐ　Ｒ，Ｌｉｕ　Ｊ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉ０ｎ　ｏｆ　ａ　ｈｉｇｈ—ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ　Ｓｃｒｅｅｎ　ｆｏｒ　ｉｄｅｎｔｉ￣ｉｎｇ　ｓｍａｌｌ　ｍｏｌｅ．．　ｃｕｌｅｓ　ｔｏ　ａｃｔｉｖａｔｅ　ｔｈｅ　Ｋｅａｐｌ—Ｎｒｆ２一ＡＲＥ　ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．ＰＬＯＳ　ＯＮＥ，２０１２，７（１０）：ｅ４４６８６．　［２２］　Ｈｅ　Ｇ，Ｔｓｕｔｓｕｍｉ　Ｔ，Ｚｈａｏ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｉｒｄ—ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　Ａｈ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ—ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ　ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ　ｒｅｐｏｒｔｅｒ　ｐｌａｓｍｉｄｓ：ａｍｐｌｉｆｉ－　ｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｄｉｏｘｉｎ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ　ｅｌｅｍｅｎｔｓ　ｄｒａｍａｔｉｃａｌｌｙ　ｉｎｃｒｅａ－　ｓｅｓ　ＣＡＬＵＸ　Ｂｉｏａｓｓａｙ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ［Ｊ］．　Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１１，１２３（２）：５１１—５２２．　［２３］　王延平，张惠丽．阿尔茨海默病相关基因白细胞介素　１８启动子区多态性的初步功能学分析［Ｊ］．中华神经　医学杂志，２０１２，１１（６）：５８１—５８５．　［２４］　苏存举，陈福生，高志贤．胶体金法与酶联免疫法相结　合快速检测克伦特罗［Ｊ］．解放军预防医学杂志，　２００８，２６（３）：１７６—１７９．　［２５］　张锋，虞闰六，任绪义．高通量检测全基因组ＤＮＡ甲基　化方法的建立［Ｊ］．中华肿瘤防治杂志，２０１１，１８（２１）：　１６７２—１６７５．　［２６］　周旋，任玉，王广秀，等．ｍｉＲ一２１调控人脑胶质瘤细胞　侵袭能力的体外研究［Ｊ］．中华神经医学杂志，２０１０，９　（１０）：９９１—９９５．　［２７］　Ｈｕｇｈｅｓ　Ｃ，Ｒａｂｉｎｏｗｉｔｚ　Ａ，Ｔａｔｅ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ａ　ｈｉｇｈ－ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ　ｇａｕｓｓｉａ　ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ　ｒｅｐｏｒｔｅｒ　ａｓｓａｙ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＧＡＤＤ４５ｃ￣ｇｅｎｅ　ｂｙ　ｍｕｔａｇｅｎｓ，ｐｒｏｍｕｔａ—　ｇｅｎｓ，ｃｌａｓｔｏｇｅｎｓ，ａｎｄ　ａｎｅｕｇｅｎｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｍｏｌｅｃ—　ｕｌａｒ　Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，２０１２，１７（１０）：１３０２—１３１５．　（收稿时间：２０１４—０４．１６修回时间：２０１４－０５．０７）　

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