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使用前先在缓冲液GD和漂洗液PW加入相应体积无水乙醇,并在瓶身上标识!
1.处理材料
a.如提取材料为血液,可直接使用200μl新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液,不足200μl可加缓冲液GA补足;
注意:如需处理更大体积血液,如300μl-1ml,应按以下步骤操作:在样品中加入3倍体积红细胞裂解液(例如,300μl血液加入900μl红细胞裂解液),颠倒混匀,室温放5min,期间再颠倒混匀几次。10000rpm(~11,500×g离心1min(若离心
机最高转速不允许,可3000rpm(~3,400×g离心5min,吸去上清,留下白细胞沉淀,加200μl缓冲液GA,振荡至彻底混匀。
红细胞裂解液本公司另外有售(目录号:RT122,可根据需要来决定购买。
b.如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量5-20μl,可加缓冲液GA补足200μl后进行下面的裂解步骤。
c.贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液,然后10,000rpm(~11,200×g离心1min倒尽上清,加200μl缓冲液GA,振荡至彻底悬浮;
d.动物组织(脾组织用量应少10mg)应先打碎处理为细胞悬液,然后10,000rpm(~11,200×g离心1min,倒尽上清,加200μl缓冲液GA,振荡至彻底悬浮。
注意:如果需要去除RNA,可加入4μlRNaseA100mg/ml)溶液(客户自备,

目录号:RT405-12,振荡15sec,室温放置5min
2.加入20μlProteinaseK溶液,混匀。
a.提取血液基因组时,只需加入ProteinaseK混匀,即可继续进行下一步。
b.提取细胞基因组时,只需加入ProteinaseK混匀,即可继续进行下一步。
c.提取组织基因组时,加入ProteinaseK混匀后,在56℃放置,直至组织溶解,简短离心以去除管盖内壁的水珠,再进行下一步骤。
注意:不同组织裂解时间不同,通常需1-3h即可完成(鼠尾需要消化过夜)。不会影响后续操作。每小时颠倒混合样品2-3次,用水浴振荡器也可。
3.加入200μl缓冲液GB,充分颠倒混匀,70℃放置10min,溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠。
注意:加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀,一般70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA
纯。当血液体积≤200μl且没有采用红细胞裂解处理,或是样本储存条件不佳,水浴后颜色可能为深褐色,注意溶液中没有团块等沉淀。
4.加人200μl无水乙醇,充分振荡混匀15sec,此时可能会出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。

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