聪明文档网
最新最全的文档下载
当前位置：
首页> 猪传染性胃肠炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
猪传染性胃肠炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
时间：2022-12-17 10:38:35 下载该word文档
猪传染性胃肠炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应
用
李子祥;邵春艳;徐琦;孙静;姜胜;何海建;吴媛;王晓杜;宋厚辉
【摘要】针对猪传染性胃肠炎病毒(TGEVS基因的保守序列设计引物,以TEGV疫苗毒株为模板,克隆S基因,并构建重组阳性质粒,优化反应体系和扩增条件,建立基于SYBRGreenⅠ染料的实时荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、重复性和灵敏度进行分析.结果显示:建立的检测方法灵敏度可达10拷贝/μL,标准曲线线性关系良好(r=0.997,扩增效率高,具有良好的特异性和重复性.使用该方法对124份临床疑似TGEV病料进行检测,阳性样本有17份,检测样本的阳性率为13.7%.该方法可用于兽医临床上TGEV的快速检测和流行病学分析.%Inthisstudy,areal-timePCRmethodwasdevelopedforTGEVdetectionusingSYBRGreenIdye.TheprimersweredesignedaccordingtotheconservedregionofTGEVSgene.ThespecificsequencewasclonedusingtheattenuatedTGEVstrainasatemplate.Thepositiverecombinantplasmidwasconstructed.TheamplificationsystemandconditionsofrealtimePCRwasoptimized.Thenthesensitivity,specificityandrepeatabilityofthisassaywereanalyzed.Theresultsshowedthatthesensitivityofthisassaywas10copies/μLofcDNAplasmid,thecorrelationco-efficientofthestandardcurvewas0.997.Atotalof124clinicalsamplesweretestedbythismethod,with17positiveresults.ThepositiverateofTGEVwas13.7%.Inconclusion,thismethodprovidedatechnicalsupportforlaboratorydiagnosticandepidemiologicalsurveyofTGEV.
【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷,期】2017(046003【总页数】5页(P129-133
【关键词】猪传染性胃肠炎;实时荧光定量PCR;特异性;敏感性【作者】李子祥;邵春艳;徐琦;孙静;姜胜;何海建;吴媛;王晓杜;宋厚辉
【作者单位】浙江农林大学动物科技学院,浙江临安311300;浙江农林大学动物科技学院,浙江临安311300;浙江农林大学动物健康检测中心,浙江临安311300;浙江农林大学动物科技学院,浙江临安311300;浙江农林大学动物科技学院,浙江临安311300;浙江农林大学动物健康检测中心,浙江临安311300;浙江农林大学动物科技学院,浙江临安311300;浙江农林大学动物健康检测中心,浙江临安311300;金华职业技术学院农业与生物工程学院,浙江金华321007;金华职业技术学院农业与生物工程学院,浙江金华321007;浙江农林大学动物科技学院,浙江临安311300;浙江农林大学动物健康检测中心,浙江临安311300;浙江农林大学动物科技学院,浙江临安311300;