去除蛋白质的好方法——安捷伦 Captiva ND
作者:Mike Chang
安捷伦样品制备应用化学家
要想使用 LC/MS/MS 分析生物基质中的化合物,首先要去除其中的蛋白质。到目前为止,最常用的方法是先沉淀,再离心分离。然而该方法涉及很多手动操作步骤,不能有效实现高通量。
现在,安捷伦 Captiva ND的出现改变了这一现状。它能够实现 96 孔过滤板的自动化孔内沉淀,从而大幅节省时间、成本和人力。
隆重推出安捷伦 Captiva ND ——独特的无滴落技术简化操作
安捷伦 Captiva ND 是一种新型的蛋白质沉淀过滤板,采用无滴落技术以简化操作。Captiva ND 采用专门设计的过滤材料,能够有效锁住用于沉淀的有机溶剂使其不滴落,从而防止样品损失,实现可靠的自动化方法。需要您手动操作的步骤只有加入生物样品、与有机溶剂混合使蛋白质沉淀,然后施加真空过滤掉沉淀的蛋白质。短短几分钟内便可得到无颗粒无蛋白的样品,用时为离心分离法的五分之一。
为了证实 Captiva ND 的优越性能,我们使用安捷伦 ZORBAX Eclipse Plus 超高压快速高分离度色谱柱(RRHD)和安捷伦 1290 Infinity 液相色谱仪,对 β 受体阻滞剂进行 LC/MS/MS 分析,将该方法和离心分离法进行了比较。图 1 为使用 Captiva ND 的样品制备方法;图 2 为离心分离法。图 3 列出了液相色谱条件。
图 1. 使用0.45 µm、10 mg 的安捷伦 Captiva ND 96 孔过滤板(部件号 A5969045)去除蛋白质。(放大 图片) | 图 2.使用离心分离法去除蛋白质。 | 图 3.液相色谱条件。(放大 图片) | ||
稳定性实验表明 Captiva ND 是高通量环境的理想选择
长时间连续进样的稳定性实验(longevity experiment)是证明生物样品清洁程度最简单有效的方法。将通过 Captiva ND 制备的样品进行 5,000 次连续进样的稳定性实验,同时监测保留时间、质谱峰面积计数和背压 (图 4 to 6).
图 4.安捷伦 Captiva ND 稳定性实验的系统背压数据。(放大 图片) | 图 5.安捷伦 Captiva ND 制备的样品进行 5,000 次连续进样得到的保留时间数据。(放大 图片) | 图 6.安捷伦 Captiva ND 制备的 β 受体阻滞剂加标血浆样品的质谱峰面积计数数据。(放大 图片) | ||
5000 次进样的稳定性实验证实在高通量环境下,Captiva ND 的可重现的操作流程能够提供一致的样品处理和可靠的过滤回收率,同时背压、保留时间和质谱信号等检测参数始终保持稳定。
无可争辩的省时优势
与离心分离法相比, Captiva ND表现出了易用和省时两大优势((表 1).
Captiva ND* | 用时 (分钟) | 离心分离法 | 用时 (分钟) |
将 0.2 mL 加标血浆样品和 0.6 mL 乙腈 + 0.1% 甲酸加入到 Captiva ND 96 孔过滤板内 | 5 | 将 0.2 mL 加标血浆样品和 0.6 mL 乙腈 + 0.1% 甲酸加入到离心管或空的 96 孔板内 | 5 |
用移液枪将每个孔内的溶液混合 5 次 | 以 10000 rpm 离心 10 分钟 | 11 | |
将进样板直接转移到色谱仪上进行分析 | 0 | 将上清液转移到 2 mL 进样样品瓶中(如果使用的是离心管)或新的空 96 孔板上(如果使用的是微孔板)进行分析 | 10 |
使用 Captiva ND 制备样品所需的总时间 | 5 | 使用离心分离法制备样品所需的总时间 | 26 |
* 使用 Tomtec 或 Hamilton 等自动化系统实现自动化。
表 1. 与离心分离法相比,安捷伦 Captiva ND 能够节省宝贵时间。
Captiva ND 的用时仅为离心分离的五分之一,采用无滴落设计,能够有效保留样品,免去了多步手动操作。因此,使用 Captiva ND 替代离心分离不仅可以节省时间,还能大幅缩减培训以及样品成本。
自动化 Captiva ND ——最佳高通量解决方案
安捷伦 Captiva 过滤板是高通量实验室的理想解决方案。它们可以轻易实现自动化,独特的无滴落设计在施加真空前能够有效防止有机溶剂损失。Captiva ND 双深度过滤板能够避免膜堵塞和样品损耗,去除蛋白质效果出众,所需时间仅为离心分离法的五分之一,丝毫无损质谱灵敏度。
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