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乙醇沉淀DNA步骤

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乙醇沉淀DNA步骤
1.加入1/10体积的乙酸钠（3mol/L,PH=于DNA溶液中充分混匀，使其最终浓度为mol/L；
2.加入2倍体积用冰预冷的乙醇混合后再次充分混匀置于-20C中15~30分钟；3.12,000g离心10分钟，小心移出上清液，吸去管壁上所有的液滴；
4.加入1/2离心管容量的70%乙醇，12000g离心2分钟，小心移出上清液，吸去管壁
上所有的液滴；
5.于室温下将开盖的EP管的置于实验桌上以使残留的液体挥发至干；6.加适量的ddHO溶解DNA沉淀。
1.加入1/10体积的乙酸钠（3mol/L，PH=于DNA溶液中充分混匀，使其最终浓度
为mol/L（Na+使DNA的负电荷中和掉）；
2.2.加入2倍体积用冰预冷的乙醇混合后再次充分混匀置于-20C中15~30分钟（这
个时间可以长于1小时）；
3.3.12,000g离心10分钟，小心移出上清液，吸去管壁上所有的液滴；
4.4.加入1/2离心管容量的70%乙醇，12000g离心2分钟，小心移出上清液，吸去管
壁上所有的液滴；
5.5.于室温下将开盖的EP管的置于实验桌上以使残留的液体挥发至干；6.6.加适量的ddH2O溶解DNA沉淀。3mol/L乙酸钠（和）溶液
【配制方法】在80ml水中溶解三水乙酸钠，用冰乙酸调节调节pH值至，加水定容到1L，分装后高压灭菌。
pH值至或用稀乙酸

苯酚、氯仿、异戊醇抽提DNA的原理是通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质，再加入乙醇沉淀即可使核酸分离岀来.
使用苯酚抽提细胞DNA时，苯酚的作用是使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶子溶于酚相，而DNA溶于水相.
氯仿的作用是克服酚的缺点；加速有机相与液相分层（酚易溶于氯仿中）？
用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？因为异戊醇可以减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡
.蛋白分
.
.最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚
.异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生.另外,异戊醇有助
.
于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定
抽提DNA去除蛋白质时，怎样使用酚与氯仿较好？酚与氯仿是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去离心，变性蛋白质的密度比水的密度为大
,使蛋白失去水合状态而变性.经过
，因而与水相分离，沉淀在水相下面，从而与溶解在水相中的，保留在最下层•作为表面变性的酚与氯仿，在去除蛋白质的作
,大约10%〜15%的水溶解在酚相中，，但氯仿与水不相混溶，不会带走］
，由于酚
DNA分开.而酚与氯仿有机溶剂比重更大
因而损失了这部分水相中的
用中，各有利弊，酚的变性作用大，但酚与水相有一定程度的互溶
DNA,而氯仿的变性作用不如酚效果好
DNA.所以在抽提过程中，混合使用酚与氯仿效果最好
与氯仿是互溶的，可用氯仿第二次变性蛋白质仿混合（1:1）使用.
.经酚第一次抽提后的水相中有残留的酚
，此时一起将酚带走.也可以在第二次抽提时，将酚与氯
为什么用酚与氯仿抽提DNA寸,