实验十二   消化实验

家兔离体小肠平滑肌生理特性

[目的要求]

  1、学习离体肠段平滑肌的实验方法。

  2、了解肠段平滑肌的生理特性。

[基本原理]

哺乳动物消化管平滑肌与肌肉组织共有的特性，如兴奋性、传导性和收缩性等。但消化管平滑肌又有其特点，即兴奋性较低，收缩缓慢，富有伸展性，具有紧张性、自动节律性，对化学、温度和机械牵张刺激较敏感等。这些特性可维持消化管内一定压力，保持胃肠等一定的形态和位置，适合于消化管内容物的理化变化，在体内受中枢神经系统和体液因素的调节。将离体组织器官置于摸拟体内环境的溶液中，可在一定时间内保持其功能。本实验以台式液作灌流液，在体外观察及记录哺乳动物离体肠段的一般生理特性。

[动物与器材]

    兔、恒温平滑肌槽、支架、烧杯、20ml注射器、张力传感器、生物机能实验系统、温度计、台式液、肾上腺素（1：10000）、乙酰胆碱（1：10000）、阿托品针剂（1支）。

[方法与步骤]

  1、装好实验装置，平滑肌槽恒温调至37℃。

  2、制备离体兔肠段

    用木槌猛击兔后头延髓部，致其昏迷后立即剖开腹腔，找到胃幽门与十二指肠交界处。在十二指肠起始端扎一线，取出十二指肠、空肠、放入冷台式液内。先用20ml注射器冲洗内容物，冲洗干净后剪成若干约1.5cm长的小肠段（每一实验小组一段）在其两端结扎，一端做一短线环固定在通气的浴皿内，另一端扎线与张力传感器相连。将肠段完全浸浴在调好温度的平滑肌槽中，并调整好台式液充气量（小气泡接连不断）。

3、开启生物机能实验系统，接通与张力传感器相连的通道。固定管并调节扎线与张力传感器，使肠段运动自如又能牵动传感器（注意：扎线不可贴壁或过紧过松）。调节增益与扫描速度，使肠段的运动曲线清晰地显示在显示器上并记录肠段活动曲线。

4、实验观察

  （1）记录对照肠段运动曲线后，停止供气1分钟并记录曲线变化，同时观察肠段紧张度变化。当出现明显变化后，立即恢复供气。用新鲜37℃台式液冲洗，待恢复正常（注意作好标记）。

  （2）记录对照肠段运动曲线后，加入25℃台式液，并记录曲线变化，同时观察肠段紧张度变化。同法，当出现明显变化后，立即用37℃台式液冲洗，待恢复正常。

  （3）同法加入45℃台式液并记录曲线变化，同时观察肠段紧张度变化。当出现明显变化后，立即用新鲜37℃台式液冲洗并待恢复。

    由于以上流出液中未加入药物，可以回收使用。以下加入药物的流出也不可再用。

（4）同法，加入2滴肾上腺素（1：10000），观察并记录曲线变化。

  （5）同法加入1～2滴乙酰胆碱（1：10000），观察并记录曲线变化。

  （6）加入3滴阿托品后立即加入于（5）同样剂量的乙酰胆碱，记录并观察曲线变化。同（5）比较曲线有何不同。

    注意：1 加药前必须准备好更换用的37℃台式液。上述药物剂量只是参考，效果不明显可补加，每次加药出现效果后，必须立即更换浴槽内的台式液并冲洗3次，待肠肌恢复正常后在观察下一项目。浴槽内台式液要保持一定温度。

2游离及取出肠段时，动作要快，取兔肠及兔肠穿线时尽可能不用金属及手指触及。为保持离体肠段的活性，可先预冷充氧的营养液，游离肠段及穿线在预冷的营养液中进行。实验中始终通气。

[思考题]

  1、本实验是否可用麻醉动物的肠段？为什么？

麻醉状态影响肠段细胞的反应性以及对药物的敏感度

  2、进行哺乳动物离体组织器官实验时，需控制哪些条件？

温度：本实验控制恒定温度37度湿度：要时刻记住用相应的润湿液润湿，本次试验用哺乳动物的台氏液PH：要与哺乳动物体液相似避免不必要的刺激：不要用手或者是金属触碰离子成分与浓度：要与相关的动物体液相似，本实验是台氏液

3、为什么加入各种药物会引起离体肠段活动的变化？其机理是什么？

·a

dr对其是抑制作用··可见离体肠管活动减弱，描记曲线出现收缩频率变慢，幅度减小以及基线下移···

ach是促进作用，··可见离体肠管活动增强，·描记曲线出现收缩频率变快，幅度增加。出现上述现象的机理，与消化道平滑肌细胞产生动作电位的离子基础是Ca2+的内流有关。

阿托品是ach的阻断剂。所以两者加入个观察到曲线无明显变化。阻断乙酰胆碱与肌膜上的M受体结合。

HCL离体肠管活动减弱，描记曲线出现收缩幅度降低，频率变慢。···H+升高能干扰肌肉的代谢和肌丝滑行的生化过程： H+能与Ca2+竞争钙调蛋白的结合位点而使肌球蛋白ATP酶活性降低；使肌原纤维对Ca2+的敏感性和 Ca2+从肌质网的释放量减少。加了NAOH肠管活动增强。···中和了H离子··改变了细胞外液的PH值···所以恢复正常··

4、加入阿托品后再加入乙酰胆碱，肠段活动受到抑制，为什么？

这两种药对肠道平滑肌的作用正好相反，乙酰胆碱能促进肠道平滑肌蠕动，阿托品是胆碱能神经阻断剂，能抑制肠道平滑肌蠕动。两药同时使用，阿托品阻断了乙酰胆碱的作用，所以表现出肠道活动受到抑制。

  5、根据实验结果，说明平滑肌的生理特性

消化管平滑肌又有其特点，即兴奋性较低，收缩缓慢，富有伸展性，具有紧张性、自动节律性，对化学、温度和机械牵张刺激较敏感等。这些特性可维持消化管内一定压力，保持胃肠等一定的形态和位置，适合于消化管内容物的理化变化，在体内受中枢神经系统和体液因素的调节。将离体组织器官置于摸拟体内环境的溶液中，可在一定时间内保持其功能。