基金项目:江苏省自然科学基金资助项目(BK 2001125)作者简介:唐元瑜,男,1971年生;成都中医药大学本科毕业,南京中医药大学硕士研究生;研究方向:中医基础理论。不同造模方法对血管内皮细胞凋亡的影响唐元瑜　朱平　许冬青　龚婕宁　杨进(南京中医药大学　基础医学院,江苏　南京　210029)　　摘　要:　目的　研究不同造模方法对血管内皮细胞凋亡的影响。方法　通过尝试采用氧化氢、内毒素、连二亚硫酸钠3种方法造成血管内皮细胞的凋亡模型。结果　通过流式细胞仪对细胞凋亡率、细胞周期的检测,证实了3种方法均可造成细胞凋亡模型。结论　选择适当剂量的造模工具是造模成功的关键。　　关　键　词:　动物模型;血管内皮细胞;细胞凋亡　　中图分类号:　R543　　文献标识码:A 　　文章编号:100420668(2004)0420044202I nfluence on V ascular E ndothelial Cell (VEC)Apoptosis for Different Modelling MethodTANG Y uan -yu ,ZHU Ping ,XU Dong -qing ,GONG J ie -ning ,Y ANG J inPreclinical Medical College of N anjing U niversity of T raditional Chinese Medicine (N anjing ,　　　China)Abstract :Objective T o study the in fluence on vascular endothelial cell (VEC )apoptosis for Different M odelling Method.Method Making VEC apoptosis m odel by using H 2O 2,endotoxin and hyposulfite of s oda.Result Through de 2termining apoptosis rate and cell cycle by flow cytometer (FC M ),three kinds of methods can all make cellular apoptosis m odels.Conclusion The key to make m odels is to select appropriate dosage.K ey w ords :animal m odel ;VEC ;apoptosis　　近年来,在血栓性疾病的研究中,血管内皮细胞是体外实验常用的造模细胞,而造模方法的不同,尤其是造模因素及剂量的选择,又往往是影响实验结果的重要因素,为了建立病因与临床接近的细胞损伤轻重适度的血管内皮细胞凋亡模型,在参考国内外相关研究进展的基础上,我们经过长期的摸索,采用了过氧化氢、内毒素、连二亚硫酸钠3种造模方法造成细胞凋亡模型,并经过筛选,通过流式细胞仪等进行细胞凋亡率、细胞周期等相关数据的检测,确定了三者的剂量既能造成细胞凋亡而又不死亡的细胞凋亡模型,为进一步的实验奠定了基础,现报告如下。1　材料和试剂1.1　实验材料人脐静脉血管内皮细胞(EC V 304),购自中国科学院上海生物化学研究所,中国科学院典型培养物保藏委员会。1.2　试剂RPMI -1640培养基(GI BC O ,US A ),胰蛋白酶(T yprin ,1:250,Amers o ,US A ),小牛血清(杭州四季清),6孔细胞培养板(C ostar ,Denmark ),5%C O 2培养箱(NAPC O ,US A ),倒置相差显微镜(Olym pus ,Japan ),大肠杆菌内毒素(LPS ,O127B8,Sigma ,US A ,Lot :28H 4042),30%过氧化氢(H 2O 2,分析纯,镇江市化剂厂,批号:2001111,临用时配成1000mm ol/L 的溶液,用孔径0.44μm 的滤膜过滤除菌备用。),连二亚硫酸钠(NaO 2SS O 2Na ,分析纯,上海久忆化学试剂有限公司批号:20030218),无水乙醇(分析纯,上海振兴化学试剂厂,批号:200201361),PI (Sigma 产品,),流式细胞仪(FACSCalibur ,BD ,US A )。・44・成都中医药大学学报　　　2004年12月第27卷第4期Journal of Chengdu University of T C M Dec.2004,V ol.27,N o.4