收稿日期:2008-02-29;修回日期:2008-03-26作者简介:昝树婷(1980-),女,硕士研究生;专业方向:生物地理学与生物多样性保护,E -m a i l :a h u z a n s h u t i n g @163.c o m ;通讯作者:周立志(1963-),男,教授,E -m a i l :z h o u l z @a h u .e d u .c n 。基金项目:国家自然科学基金项目(30470257);安徽省自然科学基金项目(0704131134);安徽大学人才队伍建设经费资助项目合肥野生动物园东方白鹳的保护遗传学初步研究昝树婷1,周立志1,江　浩2,张保卫1,吴治安2(1.安徽大学生命科学学院生物多样性研究与湿地生态研究所安徽省生态工程与生物技术重点实验室,合肥　230039;2.合肥野生动物园,合肥　230031)摘　要:研究选用E E 0.6基因和线粒体D N A 控制区(D -l o o p )作为分子标记,用于合肥野生笼养东方白鹳的性别鉴定和遗传多样性检测。研究中成功地鉴定了东方白鹳成体和幼体的性别,并且双引物的引入克服了性别鉴定中假阴性。在合肥野生动物园28个笼养个体中共检测出11种单倍型,其单倍型多样性(h )为0.8598±0.0419,核苷酸多样性(π)为0.01035±0.0058,但单倍型在繁殖个体间分布严重失衡,子一代个体的单倍型主要集中在H 1,H 2,H 3。因此,建议在进行圈养东方白鹳的繁殖管理时,注重提升各单倍型的奠基者作用,以保护笼养群体的遗传多样性。关键词:东方白鹳;E E 0.6基因;D -l o o p ;遗传多样性中图分类号:Q 95.339　Q 789文献标识码:A文章编号:1008-9632(2008)06-0022-04　　东方白鹳(C i c o n i ab o y c i a n a )是大型湿地水鸟,目前全球野生数量仅3000只左右,因此在I U C N 红色物种名录中,被列入濒危物种,也是C I T E S 附录Ⅰ物种。为了保护这一濒危物种,自20世纪80年代中后期起,多家动物园先后进行了笼养繁殖,中国是东方白鹳人工繁殖数量最多的国家[1]。合肥野生动物园从1980年起开始饲养东方白鹳,1987年首次繁殖成功。据动物园的繁殖谱系记载,至今已经人工繁殖了125只东方白鹳。然而在长期的笼养繁殖过程中常常遇到一些问题,如对于东方白鹳这种雌雄同色的鸟类,从外部形态上很难准确地鉴定性别,给人工配对带来困难[2,3];此外,笼养繁殖的群体遗传多样性不明了,难以做到优化繁殖种群。目前分子生物学技术已经普遍地应用于濒危水鸟的保护遗传学研究,在性别鉴定和遗传多样性监测方面取得了较好的进展。E E 0.6基因是鸟类性染色体连锁基因,高度保守,在鸟类的Z 与W 染色体上各有一个拷贝,但其大部分序列存在差异且两者的长度不一样。因而,可以通过选择不同的引物分别将Z 和W 染色体上的E E 0.6基因特异性片段扩增出来,雄性得到两条相同长度的片段(E E 0.6-Z ),而雌性得到不同长度的两条片段(E E 0.6-Z ,E E 0.6-W)[3],以此来判定其性别。线粒体D N A 具有进化速率快、无重组和母系遗传等特点,位于线粒体D N A (m t D N A )上的控制区(D -l o o p )序列进化速度快,可达其他区段的2.8～5倍,因而成为探讨种内遗传多样性非常有效的遗传标记之一[4]。我们突破传统的宏观繁殖管理方法,分别选用E E 0.6基因和D -l o o p 区的463b p 的序列片段作为分子标记用于笼养东方白鹳的性别鉴定和对合肥野生动物园的28只东方白鹳的饲养群体进行遗传多样性的检测,从保护遗传学角度提出优化的繁殖管理对策。1　材料与方法1.1　样品采集采自合肥野生动物园笼养条件下的28只东方白鹳(表1)。其中4只为已知性别个体,在国际繁殖谱系上的谱系号分别为:N o .60(♂)、N o .61(♀)、N o .63(♀)、N o .65(♂),另外选取了2006年一窝繁殖的5只幼鹳(F 12～F 16)共9只白鹳用于性别鉴定。为了避免采样给东方白鹳带来的伤害,选取东方白鹳胸部的覆羽作为实验材料。每个个体采集3～5根。样品采集后立即进行D N A 抽提,或置于–20℃冰箱中保存备用。1.2　基因组D N A 提取每一个体取1根羽毛,用d d H 2O清洗羽毛的根部,22第25卷第6期2008年12月　生物学杂志J O U R N A L O F B I O L O G Y　V o l .25　N o .6D e c ,2008