聪明文档网

聪明文档网

最新最全的文档下载
当前位置: 首页> 正在进行安全检测...

正在进行安全检测...

时间:    下载该word文档
DNA提取
1溶菌酶+蛋白酶K法:500uL经预处理的菌悬液于15mL无菌离心管中,加20mgmL溶菌酶25uL37℃温浴,45min再加入50uL10SDS15uLl0mgmL蛋白酶K55℃水浴1h并适时摇动混匀;之后,再依次用等体积酚、苯酚:氯仿:异戊醇(25241混合液、氯仿进行抽提,收集上清;再加入ll0体积的3molL醋酸钠及2倍体积的预冷无水乙醇,混匀后予一20℃静置30min以上;离心弃上清,沉淀用75%乙醇洗涤、干燥;最后溶于l00uL无菌双蒸水中,并加入终浓度为20mgmLRNAA37℃放置30min然后于一20℃保存,备用。

2改进CTAB法:500uL经预处理的菌悬液于15mL无菌离心管中,加入20mgmL溶菌酶l2uL1uLRNase(1mgmL冰浴1h并间隔l0min混匀1次;取出置于一20下静置20min后,放人68℃中水浴10min加入10SDS53uL继续于68℃下水浴l5min接着加入5molLNaCl87uLCTABNaCl(1CTAB073molLNaCl69uL再于68下水浴l5min;取出后,于一20℃下静置30min;之后,用等体积的氯仿/异戊醇(241进行抽提取上清,重复该步骤l次;然后加入1l0体积的3molL醋酸钠及2倍体积的预冷的无水乙醇,并于一20℃静置30min,然后离心弃上清;沉淀用70%乙醇进行洗涤,干燥后,沉淀溶于100uL无菌双蒸水中并加入RNase使其终浓度为20ugmL,于37℃消化30min,最后于-20℃保存,备用。

3试剂盒法:称取200m9粪便样品用于DNA提取,具体步骤见QIAampDNAStoolMiniKit试剂盒说明书。所得DNA溶于l00uL无菌双蒸水中,于-20℃保存。

4二氧化硅法:500uL经预处理的菌悬液于l5mL离心管中,加入10L裂解液(蛋白K10099005molLEDTA400uL1molLTris400tlLpH80;双蒸水900uL,于37℃水浴30min;之后100℃煮沸5min灭活蛋白酶K;加入100uL二氧化硅悬液和200tlL8molLKl溶液,混匀后,静置lomin,然后5000rmin离心lmin,弃上清;加入80乙醇进行洗涤后50009离心lmin弃去上清;然后55℃烘干残留乙醇;最后加入100uL无菌双蒸水洗脱DNA,并于5000rmin离心2min;上清移于15mL离心管中,-20保存,备用。l

免费下载 Word文档免费下载: 正在进行安全检测...

TOP热门搜索

  • 29.8

    ¥45 每天只需1.0元
    1个月 推荐
  • 9.9

    ¥15
    1天
  • 59.8

    ¥90
    3个月

选择支付方式

  • 微信付款
郑重提醒:支付后,系统自动为您完成注册

请使用微信扫码支付(元)

订单号:
支付后,系统自动为您完成注册
遇到问题请联系 在线客服

常用手机号:
用于找回密码
图片验证码:
看不清?点击更换
短信验证码:
新密码:
 
绑定后可用手机号登录
请不要关闭本页面,支付完成后请点击【支付完成】按钮
遇到问题请联系 在线客服