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提取DNA纯度
时间：2023-02-22 13:56:00 下载该word文档
试剂盒特点:◆经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。◆兼容性强，适用于各种不同的粪便。◆不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。◆快速，简捷，单个样品操作一般可在60分钟内完成。◆高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50kb以上，可直接用于PCR，1.DNA提取中会污染任何物质蛋白糖类RNA等。其纯度一般用核算吸收OD260/OD280（蛋白质污染）分析判断，纯DNA比值为1.8。此外用OD280/OD230估计盐离子是不是太高。5.分光光度分析DNA的A280/A260小于1.8；不纯，含有蛋白质等杂质。在这种情况下，应加入SDS至终浓度为0.5%，并重复步骤2～8。你取出1微升或2微升，用EB稀释100倍或50倍到100微升，OD260/280的比值在1.8-2.0是比较理想的，代表你的DNA纯度很高。波长260nm时，1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml，算一下，再乘以你的稀释倍数，就是浓度了紫外吸收检测DNA浓度与纯度2007年11月13日星期二11:40目的：了解紫外吸收检测DNA浓度与纯度的原理，掌握测定方法。原理：核酸的最大吸收波长为260nm，
蛋白质为280nm，在波长260nm时，1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml，单链寡核苷酸的含量为30μg/ml，可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值（OD260/OD280），估计核酸的纯度。纯净DNA的比值为1.8,RNA为2.0。若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除尽，若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干扰。紫外分光光度法只能用于测定浓度大于0.25μg/ml的核酸溶液，对浓度更小的样品，可采用荧光分光光度法。试剂与仪器：提取的质粒DNA，紫外分光光度仪。操作步骤：1分光光度计先用水在260nm和280nm两个波长下校零。2取质粒DNA样品2μl，用水稀释100倍，转入分光光度计的石英比色杯中。3在260nm和280nm分别读出样品光密度值。如果样品浓度单位为μg/μl，则样品DNA浓度为OD值的10倍，即如OD260=0.1，则样品浓度即为1μg/μl。4若OD260/OD280大于1.8，说明仍有RNA，可以考虑用RNA酶处理样品，若小于1.8，说明样品中含有蛋白质或酚，应再用酚/氯仿抽提，以乙醇沉淀纯化DNA。先说下吸光度和比值的意义。A280nm是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA