当前位置：首页> 正在进行安全检测...

正在进行安全检测...

时间：下载该word文档

高纯度质粒小提中量试剂盒说明书-天根(总2页
-本页仅作为预览文档封面，使用时请删除本页-

1.柱平衡步骤：向吸附柱CP4中（吸附柱放入收集管中）加入500μL的平衡液BL,12000rpm（~13400g）离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）
2.取5-15ml过夜培养的菌液加入离心管中，12000rpm(~13400g）离心1min，尽量吸除上清。
3.
注意：菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中，菌体量以能够充分裂解为佳，过多的菌体裂解不充分会降低质粒的提取效率。
4.向留有菌体沉淀的离心管中加入500μL溶液Pl（请先检查是否已加入RNaseA，使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
5.
注意：请务必彻底悬浮细菌沉淀，如果有未彻底混匀的菌块会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。质粒
6.向离心管中加入500μL溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。注意：温和地混合不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5min，以免质粒受到破坏。如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
7.向离心管中加入700μL溶液P3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。12000rpm(~13400g）离心10min，此时在离心管底部形成沉淀。
8.注意：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
9.将上一步收集的上清液分次加入过滤柱Cs（过滤柱放入收集管中）,12000rpm（~13400g）离心2min，小心地将离心后收集管中得到的溶液分次加入吸附柱CP4中（吸附柱放入收集管中）,（如果过滤柱中有残余的液体说明步骤5吸取的上清中杂质过多，可以延长离心的时间；如果离心后收集管底部有少量的沉淀．尽量地吸取上清）。
10.12000rpm(~13400g）离心lmin，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4放入收集管中。
11.向吸附柱CP4中加入500μL去蛋白液PD，12000rpm（~13400g）离心lmin，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4放入收集管中。
12.向吸附柱CP4中加入600μL漂洗液PW（请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400g）离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4放入收集管中。注意：加入漂洗液PW后，如果室温静置2-5min，有助于更好地去除杂质。
13.向吸附柱CP4中加入600μL漂洗液PW,12000rpm（13400g）离心lmin，倒掉收集管中的废液。
14.将吸附柱CP4重新放回收集管中置于12000rpm（~13400g）离心2min，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
15.注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱CP4开盖，置于室温放置数min，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
2

阅读全文