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正在进行安全检测...
时间：2023-11-29 20:49:27 下载该word文档
实验三细菌纯种分离、培养和接种技术一、实验目的1了解和学习水中细菌总数和大肠菌群的测定原理和测定意义;2学习和掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数的方法;3学习和掌握水中大肠菌群的检测方法;二、实验原理水的微生物学的检验,特别是肠道细菌的检验,在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义,同时也是评价水质状况的重要指标;国家饮用水标准规定,饮用水中大肠菌群数每升中不超过3个,细菌总数每mL不超过100个;它反映的是检样中活菌的数量;所谓大肠菌群,是指在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称;水的大肠菌群数是指100mL水检样内含有的大肠菌群实际数值,以大肠菌群最近似数MPN表示;水源中大肠菌群的数量,是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标;目前,国际上已公认大肠菌群的存在是粪便污染的指标;因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查;水中大肠菌群的检验方法,常用多管发酵法和滤膜法;多管发酵法可运用于各种水样的检验,但操作繁琐,需要时间长;滤膜法仅适用于自来水和深井水,操作简单、快速,但不适用于杂质较多、易于阻塞滤孔的水样;三、实验材料1、菌落总数的测定：1培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基,无菌生理盐水;2器材：灭菌三角瓶,灭菌的具塞三角瓶,灭菌平皿,灭菌吸管,灭菌试管等;2、大肠菌群的测定：1培养基：①乳糖胆盐蛋白胨培养基：蛋白胨20g,胆盐或牛、羊胆盐5g,乳糖10g,%溴甲酚紫水溶液25mL,水1000mL,;制法：将蛋白胨、胆盐、乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装,每瓶50mL或每管5mL,,并倒置放入一个杜氏小管,121℃灭菌15min;②伊红美蓝琼脂培养基：制法：将伊红美蓝琼脂粉溶于水中,校正pH后分装．121℃灭菌15min备用;平板划线法：接种是采用平板划线的方法将初发酵的大肠杆菌进行接种;四、实验方法
1、水样的采集：1自来水：先将自来水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌,再开放水龙头使水流5min,以灭菌三角瓶接取水样以备分析;2池水、河水、湖水等地面水源水：在距岸边5m处,取距水面10-15cm的深层水样,先将灭菌的具塞三角瓶,瓶口向下浸入水中,然后翻转过来,除去玻璃塞,水即流入瓶中,盛满后,将瓶塞盖好,再从水中取出;如果不能在2h内检测的,需放入冰箱中保存;2、细菌总数的测定：1水样稀释及培养：①按无菌操作法,将水样作10倍系列稀释；②根据对水样污染情况的估计,选择2-3个适宜稀释度饮用水如自来水、深井水等,一般选择1、1:10两种浓度；水源水如河水等,