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一、试剂盒打开后需要准备的工作
1、ProteinaseK（蛋白酶K）的溶解
①取4.5ml双蒸水加入蛋白酶K粉中使其充分溶解
②将溶解好的蛋白酶K溶液分装进小离心管，每管100ul〜200ul③将分装好的ProteinaseK放入-20°C冰箱中保存，使用期限为12个月2、组织抑制剂（InhibitorRemovalbfer）的调配
加入20ml无水乙醇（absoluteethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩3、洗液（washbuffer）的调配
加入80ml无水乙醇（absoluteethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩
二、组织DNA提取（试剂盒）
1、组织样品处理与消化
①将采集来的样品剪碎（WO.lcm）洗净保存液。
②加入组织破解液Tissue-lysis200ul蛋白酶K40ul然后放入55C水浴锅内3 个 小时使其充分消化。
2、DNA提取
①在消化好的组织样品中加入结合液bindingbuffer200ul然后放入 70°水浴锅 中10分钟。
②再加异丙醇lOOul混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g—分钟。③倒掉底液，加500ul组织抑制剂InhibitorRemoval然后离心倒掉底液④加洗液washingbuffer500ul离心（洗液加两次）
⑤在70C预热ElutionBuffer ，然后将洗好的柱体下部分丢掉，换新的离心管加 入ElutionBuffer200ul溶解10分钟离心保留底液放-20C保存。
三、细胞DNA的提取（试剂盒）
1、组织样品处理与消化
①将带有培养基的样品用PBS清洗干净8000rpm/1min离心，倒掉上清②加PBS200ul振荡摇匀使之样品成为单个细胞的悬浊液
③加200ulBindingBuffer，40ul蛋白酶K混合均匀放入70C水浴锅内消化 10 分钟。
2、DNA提取
①加异丙醇lOOul混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g—分钟。②倒掉底液，加500ul组织抑制剂InhibitorRemoval然后离心倒掉底液③加洗液washingbuffer500ul离心（洗液加两次）
④预热双蒸水（37C ）然后将洗好的柱体下部分丢掉，换新的离心管加入双蒸水 100ul溶解10分钟离心保留底液放-20C保存。（注：最好溶解两次）。
四、分光密度仪的操作方法及样品的测试结果
1、光密度（opticaldelnsity）简称OD2、操作示意图
电源开关〜主界面〜按1键〜核酸dsDNA3、检测
①首先做一个空白对照，将1ul的水滴到镜头上盖上盖子，按一下蓝色键
②空白对照做好后依次检测其他样品，需要记录A260/A280的比值及浓度值
五、对浓度比较低的DNA溶液进行处理
1、处理方法（乙醇沉淀-浓缩）
①实验材料的准备
2ml圆底离心管；无水乙醇；70%无水乙醇；醋酸钠（NaAcPH5.2）②操作方法
a根据DNA溶液的体积判断加1/10体积的NaAc和2 倍体积的无水乙醇加好之 后颠倒混匀放在-20°C沉淀（10min—16h或者更长时间均可）
b将沉淀好的样品离心（12000xg10 分钟）注意离心的时候离心管的管耳一定要 朝外，离心后倒掉上清，取1ml70%无水乙醇轻轻加入离心管中清洗之后倒掉洗液可清晰看到DNA片状物然后晾干。
c根据需要将晾干后的DNA用双蒸水溶解。 溶解的时候注意加双蒸水要沿着管 耳加入小滴然后轻轻转动离心管使水滴随着管壁转动充分溶解DNA，将溶解好的DNA放入-20C保存。
2、测OD上同（4—3）
六、酶切
1、酶切体系的建立
①
酶切体系的建立包含底物、限制性内切酶、缓冲液、水，根据不同的需要配比 个元素的量
②把混合好的需要酶切的样品放入37C酶切过夜
③