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巴马小型猪糖尿病心肌病模型的建立及鉴定
目的:探讨静脉注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ建立巴马小型猪糖尿病心肌病(diabeticcardiomyopathy,DCM模型,确定最佳造模方法,研究构建巴马小型猪糖尿病心肌病模型的代谢特点及心肌病理组织学变化,为今后糖尿病心肌病更广泛领域的研究提供合适的动物模型。方法:实验一:巴马小型猪DCM最佳造模方法的确立及鉴定:选取4-5月龄、体质量为19-25kg的健康雄性广西巴马小型猪12头,一日三次普通饲料喂养,随机分为两组:正常对照组(n=6只;DCM模型组(n=6只。
DCM模型组空腹12h后,一次性耳缘静脉注射STZ150mg/kg。观察两组小型猪一般状况,记录造模前及造模后体重变化及空腹血糖(fastingplasmaglucose,FPG水平。
造模前、造模后6月末及10月末,前腔静脉抽血测定丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase,ALT、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartateaminotransferase,AST、肌酐(creatinine,Cr和血尿素氮(bloodureanitrogen,BUN浓度,造模后6月选取正常对照组及DCM模型组各一头,行胰腺及心肌组织进行HE染色、胰岛β细胞免疫组化染色,造模后10月末全部处死取材,取两组小型猪心肌组织进行HE及MASSON染色。实验二:巴马小型猪DCM可复制性及特征研究:选取4-5月龄的健康雄性广西巴马小型猪10头,随机分为2组:正常对照组(n=5,DCM模型组(n=5。
DCM模型组空腹12h后,按照实验一的造模方法进行造模。测定并记录两组小型猪造模前基本情况及生化指标,造模后10月末两组小型猪前腔静脉抽血后全部处死取材,检测记录生化指标,应用试剂盒检测小型猪血清氧化应激指标: 丙
二醛(malondialdehyde,MDA、超氧化物歧化酶(OrgoteinSuperoxideDismutase,SOD、还原型谷胱甘肽(glutathioneperoxidase,GSH-PX;Westernblot法检测小型猪心肌组织NF-KBp65、BcL-2、Bax、TGFβ1表达。
造模后10月末两组小型猪心肌取材后行电镜检测。结果:实验一:(1DCM模型组小型猪均成模,表现出典型的“三多一少”的症状,无死亡及感染。
(2自造模后3天开始,与对照组比较,DCM模型组FPG水平明显升高并一直维持在较高状态(P(270.01;(3小型猪造模后6月末及10月末,正常对照组体重持续增长,而DCM模型组小型猪体重涨幅并不明显,与DCM模型组比较有差异(P(270.01。(4STZ造模后6月末,两组小型猪ALT、AST、BUN、Cr水平比较无统计学意义(P>0.05,STZ造模后10月末,与正常对照组比较,DCM模型组AST、BUN、Cr水平明显升高(P<0.05,P<0.01。
(5造模后6月末,两组小型猪胰腺及心肌组织HE染色镜下结果显示:DCM模型组可见胰岛细胞明显减少、胰岛细胞分布紊乱、萎缩,空泡变性等病理表现。胰岛β细胞免疫组化染色结果显示:DCM模型组可见散在数个胰岛细胞团,细胞