植物基因组DNA提取试剂盒(北京天根)
植物基因组DNA提取试剂盒
1 取植物新鲜组织约100 mg或干重组织约30 mg,加入液氮充分研磨。
2 将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700 μL 65℃预热缓冲液GP1的离心管中(实验前在预热的GP1中加入巯基乙醇,使其终浓度为0.1%),迅速颠倒混匀后,将离心管放在65℃水浴20 min,水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
3 加入700 μL氯仿,充分混匀,12,000 rpm(~13,400×g)离心5 min。
注:若提取富含多酚或淀粉的植物组织,可在第3步前,用酚:氯仿/1:1进行等体积抽提。
4 小心的将上一步所得水层上相转入一个新的离心管中,加入700 μL缓冲液GP2,充分混匀。
5 将混匀的液体转入吸附柱CB3中,12,000 rpm(~13,400×g)离心30 s,弃掉废液。(吸附柱容积为700μL左右,可分次加入离心。)
6 向吸附柱CB3中加入500 μL缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g)离心30 s,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
7 向吸附柱CB3中加入600 μL漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g)离心30 s,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
8 重复操作步骤7。
9 将吸附柱CB3放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min,倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中的乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
10 将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μL洗脱缓冲液TE,室温放置2-5 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min,将溶液收集到离心管中。
注意:洗脱缓冲液体积不应少于50 μL,体积过小影响回收率。洗脱液的PH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为增加基因组DNA的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min。
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